Avaliação de vetor induzível para expressão de proteínas heterólogas em Mycobacterium smegmatis mc2 155

Fernandes, Alessandra Mageste

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dc.contributor.advisor	Dumans, Ana Teresa Nogueira
dc.contributor.author	Fernandes, Alessandra Mageste
dc.date.accessioned	2018-03-14T17:14:51Z
dc.date.available	2018-03-14T17:14:51Z
dc.date.issued	2017-07-21
dc.identifier.citation	FERNANDES, Alessandra Mageste. Avaliação de vetor induzível para expressão de proteínas heterólogas em Mycobacterium smegmatis mc 2155. 2017. 57 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biomedicina) - Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro, Instituto Biomédico., Rio de Janeiro, 2017.	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/unirio/11381
dc.description	Orientador científico: Wim Maurits Sylvan Degrave; Coorientadora científica: Leila de Mendonça Lima	pt_BR
dc.description.sponsorship	n/a	pt_BR
dc.language.iso	Portuguese	pt_BR
dc.rights	openAccess	pt_BR
dc.title	Avaliação de vetor induzível para expressão de proteínas heterólogas em Mycobacterium smegmatis mc2 155	pt_BR
dc.title.alternative	Evaluation of inducible vector for expression of heterologous proteins in Mycobacterium smegmatis mc2 155	pt_BR
dc.type	bachelorThesis	pt_BR
dc.contributor.referee	Dumans, Ana Teresa Nogueira
dc.contributor.referee	Krepsky, Natascha
dc.contributor.referee	Aguiar, Diego Pinheiro
dc.contributor.referee	Emmerick, Leandro Santiago
dc.degree.department	CCBS-Instituto Biomédico	pt_BR
dc.degree.grantor	Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro - UNIRIO	pt_BR
dc.degree.level	Graduação	pt_BR
dc.degree.local	Rio de Janeiro, RJ	pt_BR
dc.degree.program	Bacharelado em Biomedicina-CCBS	pt_BR
dc.subject.cnpq	Outros	pt_BR
dc.subject.cnpq	Biomedicina	pt_BR
dc.subject.en	expression systems	pt_BR
dc.subject.en	heterologous proteins	pt_BR
dc.subject.en	M. smegmatis mc2 155	pt_BR
dc.description.abstracten	The aim of this study is to optimize the expression of heterologous proteins, especially those of bacteria of the genus Mycobacterium, such as M. tuberculosis, species that causes tuberculosis. One of the most widely used microorganisms for the production of these proteins nowadays, Escherichia coli, presents barriers such as the formation of inclusion bodies and the production of insoluble proteins containing inappropriate folding. In this sense, non-tuberculous mycobacteria stand out for the formation of expression systems from the success obtained with M. smegmatis mc2155, mainly after the use of plasmids that composed inducible expression systems. M. smegmatis mc2155 displays rapid growth in simple and defined medium and high capacity to secrete proteins into the extracellular medium with post-translational modifications; furthermore, inducible expression of the recombinant protein can be achieved with the use of regulated systems, such as the one driving expression of the enzyme Acetamidase. This enzyme is expressed by the strain at basal levels in nutrient rich media, exhibiting a hundred fold higher concentrations in the presence of inducers, accounting for up to 10% of total bacterial proteins. Plasmid pJAM2, evaluated in this study, carries the 1.5kb acetamidase regulatory region, can express proteins with a 6-histidine tag and confers resistance to the antibiotic kanamycin. Another plasmid construct – pJam2-erp - was evaluated, expressing the M. tuberculosis immunogenic protein Erp. Both plasmids were assayed in M. smegmatis under induced conditions in the presence of acetamide, aiming at their future utilization as expression systems for heterologous proteins, such as the one described for the expression of MPB-64.	pt_BR
dc.description.sponsordocumentnumber	n/a	pt_BR
dc.description.abstractpt	O trabalho objetiva otimizar a expressão de proteínas heterólogas, principalmente as de bactérias do gênero Mycobacterium, como a M. tuberculosis, espécie causadora da tuberculose. Um dos microrganismos mais utilizados para a produção dessas proteínas atualmente, a Escherichia coli, apresenta empecilhos como a formação de corpos de inclusão e a produção de proteínas insolúveis contendo dobramento inapropriado. Nesse sentido, as micobactérias não-tuberculosas se destacam para a construção de sistemas de expressão a partir do sucesso obtido com a M. smegmatis mc2155, principalmente após o uso de plasmídeos que compunham sistemas de expressão induzíveis. M. smegmatis mc2155 possui crescimento rápido em meio simples e definido e altas capacidades de secretar proteínas para o meio extracelular com modificações pós-traducionais; além disso, a expressão induzível da proteína recombinante pode ser realizada com emprego de sistemas regulados, como o que dirige a expressão da enzima Acetamidase. A enzima é expressa pela cepa em níveis basais em meio rico em nutrientes, apresentando concentrações cem vezes maiores na presença de indutores, chegando a representar 10% das proteínas totais da bactéria. O plasmídeo pJAM2, avaliado neste estudo, possui a região reguladora da expressão da Acetamidase, de 1,5kb, adicionando à proteína recombinante uma cauda de 6 resíduos de histidina, e confere às células transformadas resistência ao antibiótico Canamicina. Uma outra construção foi avaliada, pJAM2-erp, que expressa a proteína imunogênica Erp, de M. tuberculosis. Avaliou-se a atuação destas construções em M. smegmatis na presença de um indutor, a acetamida, para que os mesmos possam ser utilizados em sistemas de expressão de proteínas heterólogas em construções futuras, como na construção pretendida pJAM2-MPB64.	pt_BR
dc.subject.pt	Sistemas de expressão induzíveis	pt_BR
dc.subject.pt	proteínas heterólogas	pt_BR
dc.subject.pt	M. smegmatis mc2 155	pt_BR